PNMTase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406591

概要

PNMT（フェニルエタノールアミンN-メチルトランスフェラーゼ）はPNMTaseをコードしており、これはカテコールアミン生合成の最終酵素として、メチル基供与体であるS-アデノシル-L-メチオニンを用いてノルエピネフリンをエピネフリンへ変換する反応を触媒します。PNMTase活性は、副腎髄質および交感神経系の神経内分泌シグナルを細胞のストレス応答へと結び付け、糖質コルチコイドにより制御される転写プログラムや、より広いチロシン代謝とも統合されます。エピネフリンの利用可能量を調節することで、PNMTは心血管、代謝、神経行動に関わる下流のアドレナリン受容体シグナル伝達経路に影響を及ぼします。PNMTの発現や制御の変化は、ストレス関連表現型や内分泌・神経精神疾患の文脈におけるカテコールアミン恒常性の破綻と関連付けられています。

PNMTase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPNMT遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PNMT内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PNMTのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PNMTaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PNMTaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PNMT欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PNMTaseの機能に不可欠なPNMTエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PNMTゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PNMTase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPNMTase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PNMT遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PNMTase HDRプラスミド（h）および PNMTase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPNMTホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPNMT標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。