PNMTase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406591

Panoramica

PNMT (feniletanolamina N-metiltransferasi) codifica la PNMTasi, l’enzima terminale della biosintesi delle catecolamine che catalizza la conversione della norepinefrina in epinefrina utilizzando la S-adenosil-L-metionina come donatore di gruppi metile. L’attività della PNMTasi collega la segnalazione neuroendocrina della midollare surrenalica e del sistema simpatico alle risposte cellulari allo stress, integrandosi con programmi trascrizionali regolati dai glucocorticoidi e con il più ampio metabolismo della tirosina. Modulando la disponibilità di epinefrina, PNMT influenza a valle le vie di segnalazione dei recettori adrenergici che incidono su processi cardiovascolari, metabolici e neurocomportamentali. Alterazioni dell’espressione o della regolazione di PNMT sono state associate a una omeostasi delle catecolamine deregolata in fenotipi legati allo stress e in contesti di malattie endocrine e neuropsichiatriche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PNMTase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PNMT in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PNMT insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PNMT a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PNMTase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PNMT per lo studio della segnalazione di PNMTase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PNMT critici per la funzione di PNMTase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PNMT per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PNMTase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PNMTase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PNMT. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PNMTase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PNMTase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PNMT per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PNMT definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.