PMS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422324

概要

マウスPms2は、DNA複製時に生じる塩基‐塩基ミスマッチや挿入・欠失ループを修復する、MLH1とともにMutLαミスマッチ修復複合体を構成する中核タンパク質PMS2をコードしています。PMS2はエンドヌクレアーゼ活性を担い、切除と再合成の各ステップを協調させることで、ゲノムの安定性と適切なDNA損傷シグナル伝達を支えます。複製後修復やマイクロサテライトの完全性維持における役割を通じて、PMS2機能の変化は変異率の上昇や、複製ストレスに対する応答の破綻と関連します。研究用途では、Pms2の攪乱はミスマッチ修復欠損のモデルとして用いられ、変異の蓄積、DNA修復経路間のクロストーク、ならびにチェックポイント応答の解析に利用されます。

PMS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPms2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pms2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pms2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PMS2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PMS2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pms2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PMS2の機能に不可欠なPms2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pms2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PMS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPMS2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pms2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PMS2 HDRプラスミド（m）および PMS2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPms2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPms2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。