PMPCB Plasmide Double Nickase (h): sc-405207-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PMPCB Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PMPCB Double Nickase Plasmid (h) e il PMPCB Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PMPCB. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PMPCB Plasmide Double Nickase (h) | sc-405207-NIC | 20 µg | $410.00 |
PMPCB codifica la subunità beta catalitica della peptidasi di processamento mitocondriale (MPP), una proteasi chiave che rimuove le presequeze di targeting N-terminali dalle proteine codificate dal nucleo dopo la loro importazione nella matrice mitocondriale. Questo passaggio di processamento è essenziale per la maturazione delle proteine mitocondriali, la biogenesi della catena respiratoria e il mantenimento della fosforilazione ossidativa e dell’omeostasi metabolica. La funzione di PMPCB si interseca con le vie di importazione e di proteostasi mitocondriali, inclusa la coordinazione con le traslocasi TIM/TOM e con gli chaperoni della matrice che guidano il ripiegamento e l’assemblaggio dei precursori. L’alterazione del processamento delle presequeze mitocondriali è implicata in fenotipi di disfunzione mitocondriale ed è stata associata a meccanismi di malattie neurosviluppative e neuromuscolari legati a un metabolismo energetico compromesso.
PMPCB Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PMPCB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PMPCB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PMPCB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PMPCB interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.