PLZF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400354-ACT

ZBTB16はPLZFをコードする遺伝子であり、BTB/POZドメインをもつジンクフィンガー型転写因子として、クロマチンに関連した転写抑制および転写活性化プログラムを協調的に制御することで、細胞運命の決定を担う。ヒトの造血および免疫系の発生において、PLZFは前駆細胞の維持や系譜決定の制御に関与し、自然免疫様リンパ球の分化やサイトカイン応答性遺伝子の発現にも影響を与える。PLZF依存的ネットワークは、増殖と分化のエピジェネティック制御とも交差しており、この因子を発生制御や細胞成熟経路と結び付けている。ZBTB16/PLZFの発現異常や再構成は、血液疾患の文脈で転写プログラムの変化と関連づけられており、転写因子駆動性の表現型を研究するうえで有用な結節点となる。

PLZF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ZBTB16の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PLZF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ZBTB16 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はZBTB16転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PLZFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のZBTB16遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPLZF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびZBTB16発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPLZF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。