PLU-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403771-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PLU-1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PLU-1 Double Nickase Plasmid (h) e il PLU-1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KDM5B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PLU-1 Antibody (7H3D7): sc-517291
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PLU-1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PLU-1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM5B codifica la demetilasi della lisina istonica PLU-1 (JARID1B), una demetilasi di H3K4me3/2 che modula gli stati della cromatina a livello di promotori ed enhancer per regolare programmi trascrizionali che controllano la progressione del ciclo cellulare, la specificazione di linea e la differenziazione. Attraverso il suo dominio catalitico JmjC e le regioni di interazione con la cromatina, PLU-1 coordina la repressione epigenetica e interagisce con regolatori trascrizionali per plasmare gli output di espressione genica. Un’attività deregolata di KDM5B è stata collegata ad alterazioni della proliferazione, del mantenimento dell’identità cellulare e della plasticità trascrizionale in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo chiave nel controllo epigenetico di vie oncogeniche e di sviluppo. In quanto enzima che modifica la cromatina, PLU-1 è spesso studiato nei meccanismi di memoria trascrizionale, rimodellamento della cromatina accoppiato alla replicazione e stati cellulari associati alla resistenza.
PLU-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KDM5B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KDM5B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KDM5B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KDM5B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.