PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-408239

概要

PLEKHA5は、膜近傍のシグナル伝達および細胞骨格の構築に関与するプレクストリン相同（PH）ドメイン含有アダプタータンパク質をコードしており、極性をもつ細胞におけるタンパク質複合体の空間的な制御を支えます。ホスホイノシチドに富む膜ドメインを制御因子と結び付けることで、PLEKHA5は小胞輸送、細胞形態、ならびに状況依存的な増殖シグナルの調節などの過程に関与すると関連付けられています。PLEKHA5の発現や制御の変化は、がんのゲノミクス研究や発現解析で報告されており、細胞周期制御や遊走性表現型における役割と整合的です。これらの特徴により、PLEKHA5は成長や細胞挙動に影響する膜依存的シグナル伝達ノードを解明するための有用な標的となります。

PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLEKHA5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLEKHA5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLEKHA5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PLEKHA5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PLEKHA5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLEKHA5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PLEKHA5の機能に不可欠なPLEKHA5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLEKHA5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PLEKHA5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPLEKHA5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLEKHA5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PLEKHA5 HDRプラスミド（h）および PLEKHA5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLEKHA5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLEKHA5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。