PLC η2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-409214

概要

PLCH2 は、ホスファチジルイノシトール特異的酵素であるホスホリパーゼCエータ2（PLC η2）をコードしており、PIP2 を加水分解して IP3 とジアシルグリセロール（DAG）を生成することで、膜脂質シグナルを細胞内 Ca2+ 動員およびプロテインキナーゼC（PKC）活性化へと結び付けます。ホスホイノシチド代謝回転の調節因子として、PLC η2 はヒト細胞における Ca2+ 依存的なシグナル伝達制御、細胞骨格リモデリング、ならびに小胞輸送に寄与します。PLC に連動した脂質シグナルの変調は、増殖・分化・ストレス応答の破綻と広く関連するため、PLCH2 は疾患関連の細胞表現型における経路リワイヤリングを解析するうえで有用な結節点となります。PLC η2 を研究することで、PIP2/IP3/DAG の動態が下流の転写プログラムや Ca2+ 依存性エフェクターネットワークをどのように形作るかを解明する手がかりが得られます。

PLC η2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLCH2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLCH2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLCH2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PLC η2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PLC η2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLCH2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PLC η2の機能に不可欠なPLCH2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLCH2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PLC η2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPLC η2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLCH2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PLC η2 HDRプラスミド（h）および PLC η2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLCH2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLCH2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。