PLC β3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401181

概要

PLCB3はホスホリパーゼCβ3（PLCβ3）をコードしており、GPCRおよび一部の受容体型チロシンキナーゼシグナルの下流で機能する膜関連エフェクターとして、PIP2を加水分解してセカンドメッセンジャーであるIP3とDAGを産生します。この反応により細胞内Ca2+動員とプロテインキナーゼC（PKC）の活性化が促進され、増殖、遊走、分泌、免疫細胞機能を制御するシグナル伝達プログラムが形成されます。PLCβ3の活性はカルシウムシグナル、MAPKカスケード、細胞骨格リモデリングと統合され、細胞外からの刺激を転写・代謝応答へと結び付けます。PLCB3に関連するシグナルの破綻は、がん化や炎症の文脈で関与が示唆されており、疾患関連の細胞モデルにおける経路配線を解明するうえで有用なノードとなります。

PLC β3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLCB3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLCB3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLCB3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PLC β3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PLC β3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLCB3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PLC β3の機能に不可欠なPLCB3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLCB3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PLC β3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPLC β3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLCB3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PLC β3 HDRプラスミド（h）および PLC β3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLCB3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLCB3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。