Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO plakophilin 3 (m): sc-425181
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- plakophilin 3 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique plakophilin 3, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: plakophilin 3 Antibody (E-10): sc-166655
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO plakophilin 3 (m) | sc-425181 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Pkp3 code la plakophiline 3, une protéine à répétitions armadillo qui se localise aux desmosomes et soutient l’adhésion cellule–cellule en stabilisant les complexes cadherine desmosomale–plakoglobine et en reliant les jonctions au réseau de filaments intermédiaires de kératine. Dans les tissus de souris, PKP3 contribue à l’intégrité de la barrière épithéliale, à l’architecture tissulaire et à la résistance mécanique au stress. Par son rôle dans l’assemblage des desmosomes et le remodelage des jonctions, PKP3 recoupe des voies qui régulent l’organisation du cytosquelette, la polarité épithéliale et la signalisation dépendante du contact. Une expression altérée ou une mauvaise localisation jonctionnelle des composants desmosomaux, dont PKP3, est associée à une fragilité épithéliale et a été étudiée dans des contextes d’inflammation et de progression tumorale, où les programmes d’adhésion et de motilité sont dérégulés.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO plakophilin 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pkp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pkp3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pkp3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine plakophilin 3.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pkp3 pour l'étude de la signalisation de plakophilin 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Pkp3 essentiels à la fonction de plakophilin 3
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pkp3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le plakophilin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le plakophilin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pkp3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le plakophilin 3 plasmide HDR (m) et le plakophilin 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pkp3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pkp3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.