PKR Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400177-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PKRO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PKR (h) e o Plasmídeo Double Nickase PKR (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para EIF2AK2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PKR Anticorpo (B-10): sc-6282
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PKR Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400177-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PKR Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400177-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2AK2 codifica a PKR, uma quinase de serina/treonina induzível por interferon que atua como sensor citosólico de RNA de dupla fita durante respostas antivirais e da imunidade inata. Quando ativada, a PKR fosforila a eIF2α para suprimir o início da tradução, remodelando a proteostase celular e promovendo programas adaptativos ao estresse, como a resposta integrada ao estresse. A PKR também se interliga às vias de sinalização de NF-κB e MAPK, contribuindo para a expressão de genes inflamatórios, apoptose e regulação da autofagia. A atividade desregulada de EIF2AK2/PKR tem sido associada a alterações nas interações hospedeiro–patógeno, inflamação crônica e mudanças na sinalização relacionada ao estresse observadas em diversos contextos de doença, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em pesquisas de imunologia e estresse celular.
PKR O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EIF2AK2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EIF2AK2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EIF2AK2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EIF2AK2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.