Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PKLR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422273
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PKLR Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PKLR, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PKLR Antibody (E-2): sc-133222
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PKLR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422273 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Pklr** codifica la piruvato chinasi epatica e dei globuli rossi (PKLR), un enzima glicolitico che catalizza la conversione del fosfoenolpiruvato in piruvato con contestuale produzione di ATP. L’attività di PKLR contribuisce a controllare il flusso glicolitico, la disponibilità di piruvato per il metabolismo mitocondriale e l’equilibrio energetico cellulare, con particolare rilevanza nelle cellule eritroidi, dove la glicolisi rappresenta una fonte predominante di ATP. La regolazione di PKLR si intreccia con programmi di nutrient-sensing e trascrizionali che modellano il metabolismo dei carboidrati, incluse vie sensibili all’insulina e vie di adattamento all’ipossia. Alterazioni della funzione di PKLR sono associate a disfunzioni metaboliche dei globuli rossi e a fenotipi anemici correlati, rendendo **Pklr** un nodo utile per studiare le risposte allo stress metabolico e la fisiologia degli eritrociti in modelli murini.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PKLR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pklr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pklr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pklr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PKLR.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pklr per lo studio della segnalazione di PKLR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pklr critici per la funzione di PKLR
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pklr per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PKLR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PKLR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pklr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PKLR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PKLR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pklr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pklr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.