pki α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422270
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- pki α O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico pki α, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
pki α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422270 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Pkia codifica a proteína inibidora de proteína quinase alfa (PKIα), um inibidor endógeno do tipo pseudossubstrato que se liga à subunidade catalítica da proteína quinase A (PKA) dependente de AMPc e restringe a fosforilação de alvos a jusante. Ao modular a atividade da PKA, a PKIα influencia processos regulados por AMPc/PKA, incluindo o controlo transcricional (por exemplo, a sinalização dependente de CREB), o metabolismo, a diferenciação e as respostas ao stress. A PKIα também contribui para ajustar a comunicação cruzada (cross-talk) com a via MAPK e outras redes de quinases por meio de dinâmicas de fosforilação alteradas. A desregulação da sinalização AMPc–PKA tem sido implicada em diversos mecanismos relevantes para doenças, como crescimento celular aberrante, fenótipos neurobiológicos e alterações na sinalização endócrina, tornando Pkia um nó útil para estudos mecanísticos em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO pki α (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Pkia em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Pkia, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Pkia na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína pki α.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Pkia para a investigação da sinalização de pki α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Pkia críticos para a função pki α
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Pkia para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo pki α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo pki α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Pkia. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo pki α Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR pki α (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Pkia para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Pkia definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.