PKA IIα reg Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401080-ACT

PRKAR2A codifica a subunidade regulatória IIα da proteína quinase A (PKA) dependente de cAMP, um modulador-chave da atividade quinásica que restringe as subunidades catalíticas na ausência de cAMP e ajusta a amplitude e a compartimentalização da sinalização. Por meio de interações de ancoragem com as proteínas-andaime AKAP, PRKAR2A ajuda a localizar a PKA em microdomínios subcelulares definidos, moldando programas de fosforilação que controlam o metabolismo, a progressão do ciclo celular, as respostas transcricionais e a sinalização sináptica. Esse eixo cAMP/PKA intersecciona-se com a sinalização por GPCR e com a regulação gênica dependente de CREB, influenciando vias de diferenciação e de resposta ao estresse. A sinalização desregulada de PKA e alterações no equilíbrio das subunidades regulatórias têm sido associadas a controle aberrante do crescimento e à reprogramação de vias observada em múltiplos contextos de doença, sustentando estudos mecanísticos de transdução de sinais e plasticidade celular.

PKA IIα reg O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRKAR2A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PKA IIα reg O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRKAR2A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRKAR2A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PKA IIα reg. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRKAR2A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PKA IIα reg no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PKA IIα reg em células tumorais com expressão de PRKAR2A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.