PITSLRE B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402477-ACT

CDK11Aは、PITSLRE Bサイクリン依存性キナーゼをコードする遺伝子であり、細胞周期の進行とRNAプロセシングおよび転写制御を協調させる過程に関与するセリン／スレオニンキナーゼとして知られています。PITSLRE Bは、pre-mRNAスプライシングの制御、有糸分裂期の事象、ならびにストレス応答性シグナル伝達の調節と関連づけられており、増殖恒常性の維持における役割と整合的です。CDKファミリーの制御因子として、CDK11A活性の変化は、チェックポイント制御、アポトーシス、遺伝子発現プログラムを司る経路に影響し得ます。これらはがんやその他の増殖性疾患でしばしば破綻しているため、CDK11A／PITSLRE Bは、細胞分裂機構、転写—スプライシング連関、ならびにヒト細胞モデルにおける文脈依存的な生存性表現型を解析するうえで有用な標的となります。

PITSLRE B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDK11Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PITSLRE B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDK11A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDK11A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PITSLRE Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDK11A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPITSLRE B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDK11A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPITSLRE B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。