PITSLRE A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402476

Panoramica

CDK11B codifica la chinasi ciclina-dipendente PITSLRE A, una protein-chinasi serina/treonina implicata nel coordinare la progressione del ciclo cellulare con il controllo trascrizionale. PITSLRE A è stata collegata alla regolazione dell’elaborazione dell’RNA e dello splicing del pre-mRNA attraverso interazioni con fattori associati alla trascrizione e allo spliceosoma, sostenendo i programmi di espressione genica necessari alla proliferazione. Nelle cellule umane in proliferazione, l’attività della famiglia CDK11 viene spesso studiata nel contesto del controllo mitotico, delle risposte allo stress e del mantenimento della proteostasi. La disregolazione delle reti associate a CDK11 è stata osservata in molteplici contesti rilevanti per la malattia, in cui alterazioni del ciclo cellulare e del metabolismo dell’RNA contribuiscono a fenotipi patologici, rendendo CDK11B un nodo utile per studi meccanicistici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PITSLRE A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDK11B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDK11B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDK11B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PITSLRE A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDK11B per lo studio della segnalazione di PITSLRE A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CDK11B critici per la funzione di PITSLRE A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDK11B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PITSLRE A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PITSLRE A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDK11B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PITSLRE A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PITSLRE A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDK11B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDK11B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.