PITSLRE A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402476-ACT

CDK11B codifica a quinase humana serina/treonina PITSLRE A, um membro da família CDC2L implicado na sinalização ligada ao ciclo celular e no controle transcricional. A PITSLRE A tem sido associada a processos ligados à RNA polimerase II, ao splicing de RNA e ao processamento de mRNA, bem como à coordenação da proliferação e das respostas ao estresse por meio de redes proteicas dependentes de fosforilação. Como parte desses circuitos regulatórios, alterações na expressão ou na atividade de CDK11B são estudadas em contextos de crescimento celular desregulado, manutenção do genoma e vias relacionadas à apoptose, frequentemente perturbadas na biologia das doenças. Assim, CDK11B é um alvo útil para dissecar o controle, mediado por quinases, de programas de expressão gênica e de transições de estado celular em sistemas modelo humanos.

PITSLRE A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDK11B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PITSLRE A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDK11B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDK11B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PITSLRE A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDK11B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PITSLRE A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PITSLRE A em células tumorais com expressão de CDK11B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.