Pim-1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400376-NIC

ヒトのPIM1は、セリン/スレオニンキナーゼであるPim-1をコードしており、細胞の増殖と生存を制御する短寿命のプロトオンコジーン性調節因子です。Pim-1は、アポトーシス、細胞周期の進行、転写プログラムを調節する基質をリン酸化し、サイトカインや増殖因子シグナルからの入力を統合するとともに、JAK/STAT、PI3K/AKT、NF-κB関連経路と交差します。PIM1の発現や活性の制御異常は、複数のがんモデルにおける異常増殖やストレス耐性と関連づけられており、MYCとの腫瘍化協調や造血シグナルの改変という文脈でしばしば研究されています。これらの特性により、Pim-1は、ヒト細胞におけるキナーゼ駆動型シグナルネットワーク、アポトーシス制御、ならびに経路間クロストークを解析するための有用な結節点となります。

Pim-1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PIM1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PIM1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PIM1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PIM1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。