Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pim-1: sc-400376-ACT

PIM1 code Pim-1, une kinase sérine/thréonine constitutivement active qui intègre les signaux des cytokines et des facteurs de croissance afin de réguler la survie cellulaire, la prolifération et la capacité métabolique. Pim-1 module des réseaux de signalisation clés, notamment JAK/STAT, PI3K/AKT et NF-κB, et phosphoryle des substrats qui influencent la progression du cycle cellulaire et l’apoptose, tels que BAD, p21 et des régulateurs transcriptionnels. Par ces activités, PIM1 affecte le fonctionnement des cellules hématopoïétiques et immunitaires et contribue à des programmes d’adaptation au stress qui peuvent être détournés dans des contextes oncogéniques. Une expression et une signalisation de PIM1 dérégulées ont été associées à un contrôle prolifératif altéré, à des phénotypes de résistance aux traitements dans des systèmes modèles, ainsi qu’à des états transcriptionnels pertinents pour la maladie dans de nombreux types de cancers.

Pim-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pim-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pim-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pim-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pim-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PIM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.