PIG-A Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-422226-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PIG-AO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PIG-A (m) e o Plasmídeo Double Nickase PIG-A (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Piga. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PIG-A Anticorpo (H-6): sc-374194
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PIG-A Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-422226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PIG-A Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-422226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene **Piga** em camundongos codifica a **PIG-A**, uma subunidade catalítica do complexo **glicosilfosfatidilinositol (GPI)-N-acetilglicosaminiltransferase**, que inicia a biossíntese da âncora de GPI no retículo endoplasmático. Ao permitir a ligação de âncoras de GPI, a PIG-A sustenta a apresentação na superfície celular de diversas proteínas ancoradas por GPI envolvidas na organização de membranas, na transdução de sinais, nas interações célula–célula e em processos relacionados à imunidade. A interrupção de PIG-A perturba a montagem da âncora de GPI e pode alterar o tráfego e a estabilidade de proteínas ligadas a GPI, afetando vias que dependem de receptores e enzimas ancorados em lipídios. A disfunção de **PIGA** é a lesão genética central na hemoglobinúria paroxística noturna e também está implicada em distúrbios congênitos da glicosilação, tornando **Piga** um locus útil para estudar fenótipos dependentes de glicosilação e genética baseada em seleção.
PIG-A O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Piga em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Piga. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Piga. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Piga interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.