PI-9 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423120-LAC

Serpinb9 del topo codifica PI-9, una serpin intracellulare che inibisce la granzima B e proteasi citotossiche correlate, regolando così l’apoptosi mediata dai granuli e limitando danni indesiderati autoindotti nelle cellule immunitarie. Modulando l’attività delle proteasi a valle della degranulazione dei linfociti citotossici, PI-9 influenza i programmi di morte cellulare caspasi-dipendenti, l’omeostasi immunitaria e il rimodellamento infiammatorio dei tessuti. L’espressione di Serpinb9 viene studiata in contesti di privilegio immunitario, risposte delle cellule T guidate dall’antigene e segnalazione di stress regolata da citochine. Un’attività disfunzionale di PI-9 è stata associata a una suscettibilità alterata al danno immuno-mediato e a fenotipi di evasione immunitaria in modelli rilevanti per la malattia, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico nella ricerca su apoptosi e sorveglianza immunitaria.

Le particelle di attivazione lentivirale PI-9 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Serpinb9 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PI-9 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Serpinb9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PI-9. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Serpinb9 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.