Plasmide Double Nickase (h) PI 3-kinase p85α: sc-400224-NIC

PIK3R1 code pour la sous-unité régulatrice p85α de la phosphoinositide 3‑kinase (PI3K) de classe IA, un adaptateur clé qui stabilise et recrute les sous-unités catalytiques p110 vers les récepteurs à activité tyrosine kinase activés ainsi que vers les protéines IRS. En reliant la signalisation amont déclenchée par les facteurs de croissance à la production de PIP3, la PI3K p85α contrôle les voies AKT–mTOR et apparentées, qui gouvernent la survie cellulaire, la prolifération, le métabolisme et la régulation par rétroaction de la signalisation de l'insuline. p85α influence également l'assemblage des complexes de signalisation via la liaison des domaines SH2 aux phosphotyrosines et contribue au dialogue avec la voie MAPK et d'autres réseaux de réponse au stress. Des altérations de la fonction de PIK3R1 et une dérégulation de la voie sont associées à des états de signalisation oncogénique et à des phénotypes métaboliques, ce qui en fait un nœud largement utilisé pour les études mécanistiques du contrôle de la voie PI3K.

PI 3-kinase p85α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PIK3R1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PIK3R1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PIK3R1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PIK3R1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.