PI 3-kinase p110δ Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422232-ACT

Pik3cd codifica a subunidade catalítica p110δ da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) de classe I, uma enzima-chave que converte PIP2 em PIP3 para iniciar a sinalização a jusante via AKT/mTOR. A PI3K p110δ é enriquecida em linhagens hematopoéticas e sustenta a sinalização de receptores de antígeno, a migração dirigida por quimiocinas e programas de sobrevivência mediados por citocinas que moldam a ativação e a diferenciação de células imunes. Alterações na atividade de Pik3cd podem perturbar a homeostase imunológica e a sinalização inflamatória, tornando-o um alvo amplamente utilizado para dissecar a transdução de sinais em leucócitos. Em modelos murinos, a modulação de p110δ oferece um ponto de entrada tratável para estudar o crosstalk de vias com MAPK, NF-κB e o controle metabólico da função imune.

PI 3-kinase p110δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pik3cd sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PI 3-kinase p110δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pik3cd em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pik3cd, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PI 3-kinase p110δ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pik3cd nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PI 3-kinase p110δ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PI 3-kinase p110δ em células tumorais com expressão de Pik3cd silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.