PGRMC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405132-ACT

プロゲステロン受容体膜成分2（PGRMC2）は、ヘム結合能をもつ膜関連タンパク質であり、ステロール代謝、膜輸送、ならびにシトクロムP450依存性の酸化反応の制御に関与するとされています。ヒト細胞では、PGRMC2は細胞内コレステロールの取り扱いや、脂質恒常性および細胞ストレス応答を形作る小胞体関連プロセスとの関連が報告されています。その活性は、ミトコンドリア／小胞体機能、レドックスバランス、タンパク質複合体の組織化を制御する経路と交差しており、代謝リプログラミング研究において重要な対象となります。PGRMC2の発現やシグナル伝達の変化は、がん生物学、内分泌調節、炎症状態で観察される表現型と関連づけられており、疾患関連モデルにおける機構的な結節点としての有用性が支持されています。

PGRMC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PGRMC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PGRMC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PGRMC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPGRMC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PGRMC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPGRMC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPGRMC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPGRMC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPGRMC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。