PGC1a CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400070-ACT

PPARGC1Aは、ヒト細胞におけるミトコンドリア生合成および酸化的代謝の中枢的な制御因子である転写コアクチベーターPGC1αをコードします。PGC1αは、AMPKやサーチュイン依存性シグナル伝達など、エネルギー感知・ストレス応答経路からのシグナルを統合し、PPAR、ERR、NRF1/2といったパートナー因子を介して、脂肪酸酸化、酸化的リン酸化、抗酸化防御を制御する転写プログラムを協調的に制御します。PPARGC1A/PGC1α活性の変化は、代謝調節異常や細胞のバイオエネルギー機能低下と関連付けられており、インスリン抵抗性、肥満、神経変性、心筋細胞のエネルギー代謝などの文脈で頻繁に研究されています。栄養状態（利用可能性）と転写制御を結びつける結節点として、PGC1αはミトコンドリア機能、レドックス恒常性、生理的ストレスに対する適応応答を解析するために広く用いられています。

PGC1a CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPARGC1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PGC1a CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPARGC1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPARGC1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PGC1aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPARGC1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPGC1a依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPARGC1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPGC1a経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。