Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PFKL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402662
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PFKL Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PFKL, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PFKL Antibody (A-6): sc-393713
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PFKL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402662 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PFKL codifica l’isoforma epatica della fosfofruttochinasi-1 (PFK-1), un enzima chiave che limita la velocità della reazione e che catalizza la conversione del fruttosio-6-fosfato in fruttosio-1,6-bisfosfato nella glicolisi. Integrando input allosterici derivanti dallo stato energetico e metabolico della cellula, PFKL contribuisce a coordinare il flusso glicolitico con le esigenze biosintetiche e l’equilibrio redox. Alterazioni dell’attività e dell’espressione di PFKL sono state associate alla riprogrammazione metabolica in stati proliferativi, contribuendo a cambiamenti nell’utilizzo del glucosio, nella produzione di lattato e nell’instradamento del carbonio verso vie a valle. In quanto nodo centrale della glicolisi, PFKL è spesso oggetto di studio nelle ricerche sull’omeostasi energetica, sull’adattamento allo stress e sulle dipendenze metaboliche rilevanti per fenotipi associati a malattia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PFKL (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PFKL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PFKL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PFKL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PFKL.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PFKL per lo studio della segnalazione di PFKL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PFKL critici per la funzione di PFKL
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PFKL per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PFKL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PFKL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PFKL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PFKL Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PFKL (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PFKL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PFKL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.