PFKFB4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410933-ACT

ヒトのPFKFB4は、6-ホスホフルクト-2-キナーゼ／フルクトース-2,6-ビスホスファターゼ4をコードしている。これは二機能性酵素であり、フルクトース-2,6-ビスリン酸の細胞内量を制御し、それによってPFK1のアロステリック制御を介して解糖系フラックスを調整する。解糖系とそれに関連する代謝産物への炭素の流れを調節することで、PFKFB4は低酸素や栄養制限などのストレス条件下における代謝適応に寄与し、酸化還元バランスや生合成能にも下流の影響を及ぼす。PFKFB4の発現および活性の変化は、さまざまな疾患関連の状況、とりわけ増殖シグナルや微小環境ストレスのモデルにおいて観察される代謝リプログラミングと関連付けられている。その結果、PFKFB4は解糖系、HIFによって制御される応答、ならびに増殖制御を結び付ける経路の中で、しばしば研究対象となっている。

PFKFB4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PFKFB4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PFKFB4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PFKFB4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPFKFB4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PFKFB4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPFKFB4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPFKFB4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPFKFB4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPFKFB4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。