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PEPCK-C/PCK1CRISPR激活质粒(m) | sc-422131-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
PEPCK-C/PCK1CRISPR激活质粒(m2) | sc-422131-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
小鼠 Pck1 编码胞质型磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK-C),这是糖异生过程中的限速酶,负责将草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸,并将三羧酸(TCA)循环中间体与葡萄糖生成连接起来。PEPCK-C 整合激素与营养信号,协调肝脏葡萄糖输出,以及糖酵解/糖异生与补充反应(anaplerotic)/消耗反应(cataplerotic)通路中的更广泛碳流。Pck1 调控的改变常被用作代谢适应的分子读出指标,包括禁食反应、胰岛素与胰高血糖素信号,以及线粒体—胞质底物循环的变化。在小鼠模型中,Pck1 表达失调与胰岛素抵抗、肝脂肪变性以及葡萄糖稳态受损等代谢表型相关。
PEPCK-C/PCK1 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Pck1的表达。
PEPCK-C/PCK1 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Pck1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Pck1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性PEPCK-C/PCK1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Pck1位点,并能够研究内源性位点上依赖于PEPCK-C/PCK1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Pck1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PEPCK-C/PCK1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。