PEBP2β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401983

Panoramica

CBFB codifica la subunità beta del core-binding factor (PEBP2β), un partner privo di legame diretto al DNA che forma eterodimeri con i fattori di trascrizione RUNX, stabilizzando il legame al DNA e coordinando programmi di espressione genica che controllano la differenziazione ematopoietica, l’osteogenesi e lo sviluppo delle cellule immunitarie. Attraverso questo complesso RUNX/CBF, CBFB contribuisce a regolare vie che governano l’impegno del destino cellulare, la proliferazione e reti trascrizionali specifiche di linea. L’alterazione della trascrizione dipendente da CBFB è implicata in ematopoiesi aberrante e difetti dello sviluppo, e CBFB è spesso studiato nel contesto di riarrangiamenti cromosomici e disregolazione trascrizionale in modelli di malattie ematologiche. Queste caratteristiche rendono CBFB un nodo chiave per indagare la cooperatività tra fattori di trascrizione, la regolazione degli enhancer e i meccanismi di specificazione di linea.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PEBP2β (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CBFB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CBFB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CBFB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PEBP2β.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CBFB per lo studio della segnalazione di PEBP2β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CBFB critici per la funzione di PEBP2β
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CBFB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PEBP2β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PEBP2β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CBFB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PEBP2β Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PEBP2β (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CBFB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CBFB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.