PEBP2β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401983

概要

CBFBは、core-binding factorサブユニットβ（PEBP2β）をコードしており、DNAには直接結合しないパートナーとしてRUNX転写因子とヘテロ二量体を形成し、DNA結合の安定化と、造血分化・骨形成・免疫細胞の発生を制御する遺伝子発現プログラムの調整に関与します。このRUNX/CBF複合体を介して、CBFBは細胞運命の決定、増殖、系統特異的な転写ネットワークを司る経路の制御を助けます。CBFB依存的転写の破綻は、異常造血や発生異常に関与するとされ、CBFBは血液疾患モデルにおける染色体再編成や転写制御異常の文脈でしばしば研究されています。これらの特性により、CBFBは転写因子の協調作用、エンハンサー制御、系統決定機構を検討するうえで重要な結節点となります。

PEBP2β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCBFB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CBFB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CBFBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PEBP2βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PEBP2βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CBFB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PEBP2βの機能に不可欠なCBFBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CBFBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PEBP2β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPEBP2β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CBFB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PEBP2β HDRプラスミド（h）および PEBP2β HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCBFBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCBFB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。