PDGF Receptor beta/PDGFRB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400187-ACT

PDGFRBは血小板由来増殖因子受容体β（PDGFRβ）をコードしており、PDGF-BBおよび関連リガンドに結合する受容体型チロシンキナーゼとして、間葉系細胞の増殖・生存・遊走を制御します。活性化されるとPDGFRβは自己リン酸化を開始し、PI3K–AKT、RAS–MAPK、PLCγ–PKC、STAT経路を介してシグナル伝達を進め、細胞骨格の再構築や細胞外マトリックスとの相互作用を協調的に調節します。この受容体は血管発生と周皮細胞のリクルートにおいて中心的役割を担い、血管の安定化および組織修復過程を支えます。PDGFRBシグナルの制御異常や異常なPDGFRB融合は、線維増殖性病態、病的血管新生、腫瘍―間質相互作用（クロストーク）に関与するとされ、間質生物学の機構研究における重要な標的となっています。

PDGF Receptor beta/PDGFRB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PDGFRBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PDGF Receptor beta/PDGFRB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PDGFRB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPDGFRB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PDGF Receptor beta/PDGFRBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPDGFRB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPDGF Receptor beta/PDGFRB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPDGFRB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPDGF Receptor beta/PDGFRB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。