PDE3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401773

概要

PDE3Bは、ホスホジエステラーゼ3Bをコードしており、cAMP/cGMPの両方を基質とする二重特異性の加水分解酵素として、環状ヌクレオチドの微小ドメイン形成に関与し、PKAおよびPKG依存性シグナル伝達を制御します。脂肪細胞や肝細胞では、PDE3Bがインスリンとカテコールアミンからの入力を統合し、PI3K–AKT経路やその下流のリン酸化ネットワークなどを介して、脂肪分解、糖新生プログラム、エネルギー貯蔵の調節を担います。膵β細胞では、PDE3BがcAMP動態を調整することで、インスリン顆粒のエキソサイトーシスに影響する刺激―分泌連関を制御します。PDE3B活性の破綻は、インスリン感受性、肥満関連シグナル、脂質恒常性に関わる代謝表現型と関連づけられており、内分泌および心代謝領域の機序解明研究における有用性が示唆されています。

PDE3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDE3B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDE3B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDE3Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PDE3Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PDE3Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDE3B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PDE3Bの機能に不可欠なPDE3Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDE3Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PDE3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPDE3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDE3B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PDE3B HDRプラスミド（h）および PDE3B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDE3Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDE3B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。