PDE3B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401773-ACT

A fosfodiesterase 3B (PDE3B) é uma fosfodiesterase de nucleotídeos cíclicos de dupla especificidade que hidrolisa cAMP e cGMP para ajustar a dinâmica da sinalização por segundos mensageiros de maneira dependente do tipo celular. Ao restringir a sinalização cAMP/PKA e interagir com entradas de insulina, adrenérgicas e inflamatórias, a PDE3B contribui para a regulação da lipólise, da homeostase da glicose e do balanço energético, com papéis proeminentes em adipócitos e na sinalização metabólica ligada aos hepatócitos. A atividade da PDE3B influencia programas transcricionais a jusante e redes de fosforilação que afetam o manejo de lipídios, a função mitocondrial e vias responsivas a citocinas. A expressão ou a sinalização desreguladas de PDE3B têm sido associadas a fenótipos de doenças metabólicas e a vias de risco cardiometabólico, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de resistência à insulina e distúrbios relacionados.

PDE3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PDE3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDE3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PDE3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PDE3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDE3B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PDE3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDE3B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDE3B em células tumorais com expressão de PDE3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.