PCSK9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-430299-ACT-2

O gene Pcsk9 de camundongo codifica a pró-proteína convertase subtilisina/kexina tipo 9 (PCSK9), uma protease serina secretada que regula a homeostase do colesterol ao promover a degradação lisossomal do receptor de LDL, modulando assim a captação hepática de LDL. A atividade da PCSK9 integra-se a programas de biossíntese lipídica dependentes de SREBP e influencia o metabolismo sistêmico de lipoproteínas, havendo também relatos de papéis adicionais na sinalização inflamatória e em respostas ao estresse metabólico. A desregulação da função de Pcsk9/PCSK9 está associada à hipercolesterolemia e a fenótipos relevantes para a aterosclerose, tornando-a um alvo amplamente utilizado em estudos mecanísticos da biologia de doenças cardiovasculares e metabólicas. A edição gênica de Pcsk9 em camundongos permite a perturbação controlada do turnover do LDLR e do manejo de lipídios para a dissecação de vias, modelagem de doença in vivo e validação de modificadores genéticos que afetam características lipídicas plasmáticas.

PCSK9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pcsk9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PCSK9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pcsk9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pcsk9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PCSK9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pcsk9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PCSK9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PCSK9 em células tumorais com expressão de Pcsk9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.