PCDHGA11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407326-ACT

PCDHGA11 codifica a protocaderina gama-A11, uma proteína de adesão celular dependente de cálcio da família das protocaderinas agrupadas, que contribui para o reconhecimento célula–célula e para a arquitetura dos tecidos. As protocaderinas sustentam a sinalização dependente de contato, a organização de membrana e a dinâmica do citoesqueleto, influenciando a conectividade neuronal e interações mais amplas entre células epiteliais ou do sistema imune. Padrões alterados de expressão de protocaderinas estão frequentemente associados à adesão desregulada e a programas de linhagem observados em fenótipos do neurodesenvolvimento e em processos relacionados ao câncer. Como parte de redes de adesão e de receptores de superfície, o PCDHGA11 é estudado por seu impacto na identidade celular, na organização sináptica ou juncional e em estados transcricionais a jusante do contato intercelular.

PCDHGA11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCDHGA11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PCDHGA11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCDHGA11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCDHGA11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PCDHGA11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCDHGA11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PCDHGA11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PCDHGA11 em células tumorais com expressão de PCDHGA11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.