PCDHGA11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407326-ACT

PCDHGA11 codifica la protocaderina gamma-A11, una proteina di adesione cellulare calcio-dipendente della famiglia delle protocaderine raggruppate, che contribuisce al riconoscimento cellula-cellula e all’architettura dei tessuti. Le protocaderine supportano la segnalazione dipendente dal contatto, l’organizzazione di membrana e la dinamica del citoscheletro, influenzando la connettività neuronale e, più in generale, le interazioni tra cellule epiteliali o immunitarie. Alterazioni nei pattern di espressione delle protocaderine sono frequentemente associate a una disregolazione dell’adesione e dei programmi di linea cellulare osservata in fenotipi neuroevolutivi e in processi legati al cancro. Nell’ambito delle reti di adesione e dei recettori di superficie, PCDHGA11 viene studiato per il suo impatto sull’identità cellulare, sull’organizzazione sinaptica o delle giunzioni e sugli stati trascrizionali a valle del contatto intercellulare.

PCDHGA11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PCDHGA11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PCDHGA11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PCDHGA11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PCDHGA11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PCDHGA11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PCDHGA11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PCDHGA11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PCDHGA11 nelle cellule tumorali con espressione di PCDHGA11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.