PCDH17 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405740

Panoramica

PCDH17 (protocaderina-17) è una molecola di adesione cellula-cellula calcio-dipendente della famiglia delle protocaderine, implicata nell’instaurare e mantenere l’architettura tissutale, in particolare nel sistema nervoso. Mediante interazioni omofiliche a livello della membrana plasmatica, PCDH17 contribuisce alla crescita dei neuriti, alla connettività sinaptica e ai processi di selezione/ordinamento cellulare che modellano la formazione dei circuiti. Le dinamiche di adesione associate a PCDH17 si intrecciano con il rimodellamento del citoscheletro e con vie di segnalazione che regolano migrazione e differenziamento, inclusi processi legati alle GTPasi della famiglia Rho. Un’espressione deregolata o il silenziamento epigenetico di PCDH17 sono stati riportati in molteplici contesti tumorali e vengono studiati per il loro ruolo nell’adesione alterata, nel comportamento invasivo e in programmi trascrizionali specifici di linea cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PCDH17 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PCDH17 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PCDH17 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PCDH17 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PCDH17.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PCDH17 per lo studio della segnalazione di PCDH17, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PCDH17 critici per la funzione di PCDH17
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PCDH17 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PCDH17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PCDH17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PCDH17. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PCDH17 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PCDH17 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PCDH17 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PCDH17 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.