Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
PCB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401254
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PCB O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PCB, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PCB Anticorpo (D-9): sc-365673
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PCB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401254 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
A PC humana (piruvato carboxilase) codifica uma enzima mitocondrial dependente de biotina que catalisa a carboxilação do piruvato em oxaloacetato, impulsionada por ATP, repondo intermediários do ciclo do ácido tricarboxílico (TCA) e sustentando a anaplerose. A atividade da PC conecta o metabolismo central do carbono à gliconeogênese, à lipogênese e à biossíntese de aminoácidos, influenciando o equilíbrio redox mitocondrial e a homeostase energética celular. Alterações na expressão ou na função da PC têm sido associadas a erros inatos do metabolismo e à reprogramação metabólica observada em diversos contextos de doença, incluindo câncer e distúrbios hepáticos, nos quais o fluxo anaplerótico pode afetar a proliferação e as respostas ao estresse.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PCB (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PC em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PC, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PC na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PCB.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PC para a investigação da sinalização de PCB, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PC críticos para a função PCB
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PC para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PCB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PCB Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PC. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PCB Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PCB (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PC para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PC definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.