paxillin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416733

Panoramica

PXN codifica per la paxillina, una proteina adattatrice delle adesioni focali che coordina la segnalazione mediata dalle integrine con il rimodellamento del citoscheletro di actina, controllando adesione, spreading e migrazione cellulare. La paxillina funge da piattaforma (scaffold) per chinasi e proteine strutturali, tra cui FAK e SRC, collegando i segnali provenienti dalla matrice extracellulare a vie a valle come MAPK/ERK e PI3K. Attraverso la regolazione del turnover delle adesioni focali e della meccanotrasduzione, la paxillina contribuisce a processi quali la riparazione delle ferite, il traffico delle cellule immunitarie e le risposte cellulari guidate dalla matrice extracellulare. La deregolazione della segnalazione della paxillina e delle dinamiche delle adesioni focali è spesso studiata nel contesto di alterazioni della motilità cellulare e di fenotipi di invasione rilevanti per la biologia del cancro e per microambienti fibrotici o infiammatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO paxillin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PXN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PXN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PXN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina paxillin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PXN per lo studio della segnalazione di paxillin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PXN critici per la funzione di paxillin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PXN per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal paxillin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal paxillin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PXN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal paxillin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR paxillin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PXN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PXN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.