Pax-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401757

Übersicht

PAX8 kodiert Pax-8, einen Paired-Box-Transkriptionsfaktor, der die Festlegung von Zelllinien (Lineage Specification) und die Organogenese reguliert, mit wichtigen Funktionen in der Entwicklung der Schilddrüsenfollikel sowie der epithelialen Differenzierung in Niere und Müller-Gang-System. Pax-8 bindet an sequenzspezifische DNA-Motive, um Transkriptionsprogramme zu koordinieren, die Zellidentität, Proliferation und Überleben steuern, und arbeitet mit anderen transkriptionellen Regulatoren zusammen, um Chromatin sowie Genexpressionsnetzwerke zu formen. In adulten Geweben trägt PAX8 zur Aufrechterhaltung differenzierter Zustände bei; eine fehlregulierte Expression oder genomische Umlagerungen wurden mit veränderter transkriptioneller Kontrolle in mehreren epithelialen Malignomen in Verbindung gebracht, weshalb PAX8 häufig als Marker in Studien zur Bestimmung des Tumorursprungs verwendet wird. Diese Funktionen machen PAX8 zu einem nützlichen Ansatzpunkt, um entwicklungsbiologische Genregulationsschaltkreise, epitheliale Plastizität und Lineage-Tracing-Signaturen in menschlichen Zellmodellen zu untersuchen.

Das Pax-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PAX8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PAX8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PAX8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pax-8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PAX8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pax-8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PAX8-Exone abzielen, die für die Pax-8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PAX8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pax-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Pax-8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PAX8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pax-8 HDR-Plasmid (h) und Pax-8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PAX8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PAX8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.