PARP-10 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-437160-ACT

マウスのParp10は、タンパク質のMARylation（モノADPリボシル化）を触媒するモノ（ADP-リボシル）トランスフェラーゼであるPARP-10をコードしており、DNA複製ストレス、タンパク質恒常性、自然免疫シグナル伝達に対する細胞応答の協調に寄与します。PARP-10は、DNA修復経路の選択の制御や複製フォークの安定性の維持に関与することが示されており、特定の基質タンパク質をADPリボシル化することでシグナル伝達ネットワークを調節できます。これらの作用を通じて、PARP-10は細胞周期進行の制御、ストレス誘導性の転写プログラム、ならびに炎症性シグナル伝達カスケードの調節に寄与します。PARP-10関連経路を含むPARPファミリー活性の破綻は、ゲノム不安定性の機構研究、がんに関連するストレス適応、免疫介在性疾患の生物学に関する研究において重要です。

PARP-10 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Parp10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PARP-10 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Parp10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はParp10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PARP-10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のParp10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPARP-10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびParp10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPARP-10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。