PAO Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432791

Panoramica

Il gene murino Smox codifica la poliammina ossidasi (PAO), un enzima flavina-dipendente che catalizza la retro-conversione delle poliammine, contribuendo all’omeostasi di spermina e spermidina e regolando il flusso intracellulare di poliammine. L’attività della PAO collega il metabolismo delle poliammine all’equilibrio redox cellulare attraverso la produzione di perossido di idrogeno e aldeidi reattive, influenzando le risposte allo stress ossidativo, la funzione mitocondriale e la segnalazione infiammatoria. Alterazioni nella regolazione di SMOX/PAO sono state associate a proliferazione disregolata, maggiore suscettibilità al danno al DNA e contesti di lesione tissutale in cui si intersecano turnover delle poliammine e segnalazione mediata da ROS, inclusi modelli di biologia del cancro e neuroinfiammazione. In quanto nodo metabolico, la PAO offre un punto di accesso meccanicistico per studiare come il catabolismo delle poliammine moduli le decisioni sul destino cellulare e le vie di adattamento allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAO (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Smox in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Smox insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Smox a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAO.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Smox per lo studio della segnalazione di PAO, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Smox critici per la funzione di PAO
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Smox per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PAO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PAO CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Smox. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PAO Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PAO (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Smox per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Smox definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.