Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pannexin-2 (h): sc-405925

Présentation

PANX2 code la pannexine‑2, une protéine formant des canaux dans la membrane plasmique qui médie la libération d’ATP et d’autres petites molécules afin de coordonner la signalisation autocrine et paracrine. La pannexine‑2 contribue à des réseaux de signalisation purinergique qui influencent la dynamique du calcium intracellulaire, les réponses associées à l’inflammasome et la communication neurone–glie, reliant ainsi l’activité des canaux au stress cellulaire et à la modulation de l’immunité innée. Son expression est enrichie dans le système nerveux et a été étudiée dans des contextes de neuroinflammation, de lésions excitotoxiques et de modifications du comportement des cellules tumorales, où la signalisation par les nucléotides extracellulaires peut remodeler la prolifération et les signaux du microenvironnement. Ces propriétés font de PANX2 une cible utile pour analyser comment des canaux membranaires intègrent le stress métabolique aux voies inflammatoires et synaptiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pannexin-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PANX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PANX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PANX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pannexin-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PANX2 pour l'étude de la signalisation de Pannexin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PANX2 essentiels à la fonction de Pannexin-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PANX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pannexin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Pannexin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PANX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pannexin-2 plasmide HDR (h) et le Pannexin-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PANX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PANX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.