Pannexin-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-424967-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Pannexin-1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Pannexin-1 Double Nickase Plasmid (m) e il Pannexin-1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Panx1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Pannexin-1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424967-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Pannexin-1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424967-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Panx1 codifica pannexina-1, un canale di membrana a grande poro che media il rilascio di ATP e metaboliti, modulando la segnalazione purinergica autocrina e paracrina. L’attività della pannexina-1 viene attivata a valle della stimolazione del recettore P2X7 e di segnali infiammatori, collegando la depolarizzazione di membrana e vie associate alle caspasi alla segnalazione extracellulare dei nucleotidi. Nei tessuti murini, Panx1 contribuisce all’attivazione delle cellule immunitarie, alle risposte legate all’inflammasoma e a dinamiche coordinate del calcio, con ulteriori ruoli nella regolazione del tono vascolare e nella comunicazione neuro-gliale. Un rilascio di ATP dipendente da PANX1 deregolato è stato implicato in modelli di neuroinfiammazione, danno ischemico e segnalazione aberrante della morte cellulare, rendendo Panx1 un bersaglio utile per studi meccanicistici su infiammazione e risposte allo stress.
Pannexin-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Panx1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Panx1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Panx1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Panx1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.