PAC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401917

概要

二重特異性ホスファターゼ2（DUSP2、PAC-1とも呼ばれる）はMAPキナーゼホスファターゼの一種で、活性化されたERK1/2およびp38を脱リン酸化することで、MAPKシグナル伝達の強度と持続時間を調節します。ヒトの免疫・造血系の文脈では、DUSP2はMAPKカスケードの負のフィードバック調節因子として働き、刺激依存的にサイトカイン駆動性の転写プログラム、増殖、アポトーシスの制御に寄与します。その発現は活性化リンパ球で誘導されることが多く、炎症シグナルやストレス応答に関連する下流経路を調節し得ます。DUSP2の活性や発現の破綻は免疫機能障害やがん関連のシグナル伝達表現型と関連づけられており、MAPK経路制御の機構研究における有用な結節点となっています。

PAC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDUSP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DUSP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DUSP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAC-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAC-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DUSP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAC-1の機能に不可欠なDUSP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DUSP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPAC-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DUSP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAC-1 HDRプラスミド（h）および PAC-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDUSP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDUSP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。