p73 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416822-ACT

ヒトTP73はp73をコードしており、p73はp53ファミリーに属する転写因子として、細胞周期停止、アポトーシス、分化、老化を含む細胞運命の決定を制御する。p73は、状況に応じた標的遺伝子の転写活性化を介してストレス応答を統合し、DNA損傷シグナル伝達、ミトコンドリア依存性アポトーシスプログラム、および発生過程の経路に影響を与える。アイソフォームの多様性（TAp73およびΔNp73）により転写出力は、アポトーシス促進または生存促進の状態へと偏り得て、上皮の恒常性や神経発生を形作る。TP73活性の異常やアイソフォームバランスの変化は、転写ネットワークとゲノム安定性を調節することから、がん生物学、神経発達障害、ならびに化学療法抵抗性の機構において頻繁に研究されている。

p73 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TP73の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p73 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TP73 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTP73転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p73の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTP73遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp73依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTP73発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp73経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。