p57 Kip2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400444-ACT

CDKN1C は p57 Kip2 をコードしており、p57 Kip2 は刷り込み（インプリンティング）を受ける CIP/KIP ファミリーのサイクリン依存性キナーゼ阻害因子として、CDK2 および CDK1 の活性を抑制し、G1 期停止を確立して分化プログラムを協調的に制御します。p57 Kip2 は、TGF-β/SMAD や PI3K–AKT 経路からの入力など、発生および増殖因子経路からのシグナルを統合し、細胞周期チェックポイント、系譜決定、組織成長の制御を調節します。CDKN1C の発現異常や刷り込み異常は、異常増殖や発生疾患と関連しており、p57 Kip2 の量的変化は、がん生物学、幹細胞の休止状態、胎盤発生といった文脈で頻繁に研究されています。増殖を制御する核内因子としての p57 Kip2 は、11p15 の刷り込みクラスターにおけるエピジェネティック制御や、老化および細胞運命転換を司る経路とも関係します。

p57 Kip2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDKN1Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p57 Kip2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDKN1C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDKN1C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p57 Kip2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDKN1C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp57 Kip2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDKN1C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp57 Kip2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。