p38 beta MAPK11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400173-ACT

MAPK11 codifica a p38β, uma proteína quinase ativada por stress e pertencente à família p38 MAPK, que integra sinais extracelulares como citocinas inflamatórias, stress oxidativo e exposição a UV em respostas de sinalização dependentes de fosforilação. A p38β modula programas transcricionais e a regulação pós-transcricional que controlam a produção de citocinas, checkpoints do ciclo celular, apoptose e diferenciação, através de substratos a jusante, incluindo proteínas quinases ativadas por MAPK e fatores de transcrição. A atividade de MAPK11 contribui para a sinalização da imunidade inata e para vias mais amplas de resposta ao stress, que se cruzam com a inflamação regulada por NF-κB e com a comunicação entre vias na rede de MAPKs. A desregulação da sinalização p38 tem sido associada a processos inflamatórios e neurodegenerativos e também à biologia tumoral de forma dependente do contexto, sustentando estudos mecanísticos sobre reconfiguração de vias e adaptação ao stress.

p38 beta MAPK11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAPK11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

p38 beta MAPK11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAPK11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAPK11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de p38 beta MAPK11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAPK11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de p38 beta MAPK11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via p38 beta MAPK11 em células tumorais com expressão de MAPK11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.