Plásmido Doble Nickase (h) p300: sc-400055-NIC

EP300 codifica p300, un coactivador transcripcional pleiotrópico y una acetiltransferasa de histonas que acetila lisinas en histonas y en numerosos factores de transcripción para modular la accesibilidad de la cromatina y los programas de expresión génica. p300 integra señales de vías del desarrollo y de respuesta al estrés, incluida la transcripción dependiente de p53, HIF-1, NF-κB, TGF-β/SMAD y receptores nucleares, influyendo así en el control del ciclo celular, la diferenciación, las respuestas al daño del ADN y la adaptación metabólica. Como regulador epigenético central, la alteración de EP300 se asocia con la desregulación transcripcional generalizada observada en diversos contextos tumorales y con fenotipos del neurodesarrollo, lo que refleja su papel en la actividad de los potenciadores (enhancers) y en la regulación génica específica de linaje. Estas características hacen de p300 un nodo ampliamente utilizado para analizar el control de la transcripción mediado por la cromatina y las redes de regulación génica dependientes de señales.

p300 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EP300 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EP300. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EP300. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EP300 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.