p300 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400055-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- p300O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase p300 (h) e o Plasmídeo Double Nickase p300 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para EP300. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:p300 Anticorpo (F-4): sc-48343
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
p300 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400055-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p300 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400055-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EP300 codifica a p300, um coativador transcricional pleiotrópico e acetiltransferase de histonas que acetila lisinas em histonas e em numerosos fatores de transcrição para modular a acessibilidade da cromatina e programas de expressão gênica. A p300 integra sinais de vias de desenvolvimento e de resposta ao estresse, incluindo transcrição dependente de p53, HIF-1, NF-κB, TGF-β/SMAD e receptores nucleares, influenciando assim o controle do ciclo celular, a diferenciação, as respostas a danos no DNA e a adaptação metabólica. Como regulador epigenético central, a perturbação de EP300 está ligada à desregulação transcricional ampla observada em diversos contextos tumorais e a fenótipos do neurodesenvolvimento, refletindo seu papel na atividade de enhancers e na regulação gênica específica de linhagem. Essas características fazem da p300 um alvo amplamente utilizado para dissecar o controle da transcrição mediado por cromatina e redes regulatórias de genes dependentes de sinais.
p300 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus EP300 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de EP300. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função EP300. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com EP300 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.