P2Y9 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429620

Visão geral

Lpar4 codifica o receptor purinérgico P2Y9, um receptor acoplado à proteína G (GPCR) implicado na sinalização mediada por nucleotídeos/lipídios extracelulares, que influencia a comunicação celular, cascatas de segundos mensageiros próximas à membrana e a regulação dependente do contexto da motilidade e da diferenciação. Em sistemas murinos, a sinalização da família P2Y comumente converge para vias que controlam a dinâmica do cálcio intracelular, o balanço de AMPc e redes de quinases a jusante que coordenam a remodelação do citoesqueleto e respostas transcricionais. Assim, a atividade de Lpar4/P2Y9 é relevante para estudos de tráfego de células imunes, comunicação cruzada estroma–epitélio e homeostase tecidual. A desregulação da sinalização purinérgica dirigida por GPCR tem sido associada a fenótipos inflamatórios e fibróticos, bem como a alterações na sinalização de crescimento, tornando Lpar4 um nó útil para a investigação mecanística de vias.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P2Y9 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Lpar4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Lpar4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Lpar4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P2Y9.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Lpar4 para a investigação da sinalização de P2Y9, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Lpar4 críticos para a função P2Y9
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Lpar4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo P2Y9 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo P2Y9 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Lpar4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo P2Y9 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR P2Y9 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Lpar4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Lpar4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.