P2Y5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426423

概要

Lpar6はP2Y5受容体をコードしており、リゾホスファチジン酸（LPA）に応答するGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。この受容体は脂質メディエーターの感知に関与し、細胞骨格ダイナミクス、細胞極性、分化を制御する経路を介した下流シグナル伝達に関与すると考えられています。マウス組織では、P2Y5の活性は細胞外LPAを細胞内のセカンドメッセンジャーネットワークへと結び付け、MAPKやRhoファミリーのシグナル出力に影響し得ることで、上皮組織の構築や毛包生物学といった過程を形作ります。遺伝学的・機能的研究により、LPAR6/P2Y5は毛髪成長の表現型や外胚葉の発生と関連付けられており、LPA受容体シグナルの変化は炎症性および線維化の微小環境全般とも広く関係します。そのためLpar6は、生理学的に意義のあるモデルにおいて、GPCR駆動性の脂質シグナル伝達とそれが細胞挙動に及ぼす影響を解明するための有用な手がかりとなります。

P2Y5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるLpar6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Lpar6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Lpar6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、P2Y5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、P2Y5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Lpar6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• P2Y5の機能に不可欠なLpar6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Lpar6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• P2Y5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびP2Y5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Lpar6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  P2Y5 HDRプラスミド（m）および P2Y5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはLpar6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のLpar6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。