P2X7 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422093-ACT

マウスのP2rx7は、ATPによって開口するカチオンチャネルであるP2X7受容体をコードしている。P2X7は免疫細胞およびグリア細胞で高発現しており、細胞外の危険シグナルを、Ca²⁺/Na⁺の流入、K⁺の流出、そして持続的刺激下での膜孔形成へと結び付ける。P2X7はインフラマソームシグナル伝達の主要な上流制御因子で、NLRP3の活性化とIL-1β/IL-18の成熟を促進するほか、ホスホリパーゼ活性、MAPK/NF-κB経路、細胞死プログラムにも影響する。これらの機構を通じて、P2rx7はサイトカイン放出、食細胞の抗菌応答、神経免疫コミュニケーションの制御に寄与する。P2X7シグナルの変化は、前臨床モデルにおいて炎症性・神経炎症性の表現型、痛覚過敏、腫瘍微小環境における免疫調節と関連づけられており、経路に焦点を当てた研究に有用であることが示唆されている。

P2X7 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性P2rx7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

P2X7 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における P2rx7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はP2rx7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性P2X7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のP2rx7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるP2X7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびP2rx7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるP2X7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。