p19 INK4D/CDKN2D Plasmide Double Nickase (h): sc-401761-NIC

CDKN2D codifica p19^INK4D, un inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti che si lega preferenzialmente a CDK4 e CDK6 per limitare la fosforilazione di RB1 dipendente dalla ciclina D e far rispettare il checkpoint G1/S. Riducendo la trascrizione guidata da E2F, p19^INK4D integra segnali antiproliferativi con l’uscita dal ciclo cellulare e programmi di differenziamento, anche nelle linee ematopoietiche e neuronali. La funzione di CDKN2D interseca la segnalazione mitogena RAS–MAPK e vie responsabili allo stress che convergono sull’attività delle CDK e sul controllo dei checkpoint. Un’alterata regolazione della famiglia INK4 e dei componenti della via di RB è spesso implicata nella proliferazione deregolata in modelli cellulari rilevanti per diverse patologie, rendendo CDKN2D un nodo utile per studiare il controllo del ciclo cellulare e i meccanismi di soppressione della crescita.

p19 INK4D/CDKN2D Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDKN2D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDKN2D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDKN2D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDKN2D interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.