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p19 INK4D/CDKN2D双切口酶质粒(h) | sc-401761-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p19 INK4D/CDKN2D双切口酶质粒(h2) | sc-401761-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKN2D 编码 p19 INK4D,这是一种细胞周期依赖性激酶(CDK)抑制因子,优先与 CDK4 和 CDK6 结合,从而抑制细胞周期蛋白 D 依赖的 RB1 磷酸化,并维持 G1/S 检查点。通过限制 E2F 驱动的转录,p19 INK4D 将抗增殖信号与细胞周期退出及分化程序相整合,这一点在造血谱系和神经谱系等细胞类型中尤为重要。CDKN2D 的功能还与促有丝分裂的 RAS–MAPK 信号以及应激响应通路相交汇,这些通路共同作用于 CDK 活性与检查点控制。INK4 家族及 RB 通路组分的调控异常常与多种疾病相关的细胞模型中增殖失衡有关,因此 CDKN2D 是研究细胞周期控制与生长抑制机制的一个有价值的关键节点。
p19 INK4D/CDKN2D 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 CDKN2D 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CDKN2D内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏CDKN2D的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了CDKN2D基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。